Waters Styragel色譜柱的保養(yǎng)和維護
本章介紹了：
■ 故障排查
■ 色譜柱保存
■ 效率測試
a.故障排查
表3描述了具體問題、原因和糾正措施。
問題 | 原因 | 糾正措施 |
系統(tǒng)操作壓力增加 | 入口過濾器濾芯（僅第一根色譜柱）被顆粒堵塞。 進樣器和泵密封件脫落。 | 更換入口過濾器濾芯。 安裝Styragel預(yù)柱。 在泵與第一根色譜柱之間安裝在線過濾器。 |
分離度下降，色譜峰展寬， 塔板數(shù)減少 | 管件堵塞 | 更換管件 |
過濾器濾芯部分堵塞 | 更換或清洗入口和/或出口過濾器濾芯 | |
進樣器故障 | 維修進樣器 | |
平衡不足 | 繼續(xù)平衡 | |
色譜柱損壞 | 更換色譜柱 |
表3. 色譜柱故障排查。
b. 色譜柱保存
如果您打算在24小時內(nèi)再次使用色譜柱，則無需進行特殊的保存。但是，應(yīng)確保色譜柱不得變干。如果儲存時間較長，請將色譜柱放回其包裝盒中，并塞緊端塞進行儲存。在沒有溶劑流動的情況下，請勿將色譜柱置于高溫環(huán)境中。
為獲得最長的色譜柱壽命，應(yīng)避免溫度循環(huán)變化。色譜柱未使用時，應(yīng)維持在運行溫度，并將流速降低至0.1 mL/min。
要重啟色譜柱，將流速維持在0.1 mL/min，并且（如果適用）在10小時內(nèi)將溫度逐漸升高。然后將流速設(shè)置為所需的操作流速。
c. 效率測試
沃特世色譜柱經(jīng)過測試，符合我們的指標。柱效隨下列條件不同可能略有變動：
■ 所用設(shè)備的類型和條件
■ 樣品性質(zhì)
■ 儀器設(shè)置
執(zhí)行效率測試。為了測試系統(tǒng)及系統(tǒng)中的每根色譜柱，須執(zhí)行以下兩種測試：
■ 儀器譜帶展寬測試
■ 柱效測試
何時執(zhí)行效率測試
每次增加色譜柱或改動系統(tǒng)時均需執(zhí)行效率測試。在系統(tǒng)使用過程中，應(yīng)定期執(zhí)行效率測試。
如果正常操作色譜柱的過程中發(fā)生問題，請重復(fù)初始效率測試的步驟并對比結(jié)果。在非串聯(lián)條件下執(zhí)行柱效測試，可用于監(jiān)測儀器譜帶展寬現(xiàn)象。譜帶展寬過大的問題需在色譜柱安裝之前得到解決。
1）測試儀器譜帶展寬
測試步驟
合理操作的系統(tǒng)的譜帶展寬應(yīng)當小于150 μL（對于溶劑高效色譜柱，譜帶展寬應(yīng)小于75 μL）。測定系統(tǒng)譜帶展寬的方法：
1. 從系統(tǒng)中取出色譜柱。
2. 用零死體積接頭連接入口與出口管件。
3. 將流速設(shè)置為1.0 mL/min。
4. 使用較快的紙速可獲得易于測量峰寬的色譜峰。如果使用的是數(shù)據(jù)系統(tǒng)，請將采樣速率設(shè)置為每秒至少10個數(shù)據(jù)點。用戶可能需要調(diào)節(jié)檢測器靈敏度以保持色譜峰以合適的尺寸顯示。
5. 注入與塔板數(shù)測定分析相同的樣品（見表4、5和6）。
6. 在所得峰的4.4%峰高處測量峰寬，以獲得μL值。
圖5顯示了5 sigma方法，其中峰寬（w）在峰高（h）的4.4%處測得。
2）柱效測試
下文列出的柱效測試步驟可用于計算理論塔板數(shù)，該參數(shù)是衡量系統(tǒng)色譜柱效率的指標。
溶劑無需使用色譜柱出廠溶劑測定色譜柱的效率。使用不同的溶劑時，測得的初始塔板數(shù)將會不同。請使用常規(guī)操作溶劑分別測試色譜柱。
測試步驟
柱效測試的方法：
1. 對于HR 0.5、HR 1、HR 2和HR 4E色譜柱，將流速緩慢增至1.0 mL/min；對于所有其它色譜柱，將流速增至2.0 mL/min。
2. 適當調(diào)節(jié)檢測器衰減，使色譜峰達到全尺寸的70%（噪音水平小于全尺寸的0.5%）。
3. 將記錄儀紙速設(shè)置為50 mm/min，或?qū)?shù)據(jù)系統(tǒng)采集速率設(shè)置為每秒至少5個數(shù)據(jù)點。
4. 標記溶液的進樣體積最高為20 μL。溶液標記物最高濃度為10%。對于溶劑高效色譜柱，進樣體積最多5 μL溶液。
關(guān)于執(zhí)行效率測試時所用的標記物，請參閱表4、表5或表6。
5. 記錄保留時間、儀器設(shè)置和色譜柱配置，以便將來校準時可以準確重復(fù)各項條件。
6. 采用正切法計算塔板數(shù)（見圖6）。利用這些結(jié)果對色譜柱整個壽命期內(nèi)的性能進行比較。
7. 當任何色譜柱的塔板數(shù)低于初始值30%以上時，應(yīng)更換色譜柱。
